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產品名稱：HiPURE高純度質粒大提試劑盒
產品型號： 25T
產品廠商：通蔚生物
產品價格：1610
產品庫存：144
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簡單介紹：

HiPURE高純度質粒大提試劑盒本試劑盒用于高純度質粒DNA的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質，在低鹽、高pH條件下洗脫，得到純度較高的質粒 DNA 。使用本試劑盒每次可處理 1-5 ml 過夜培養的菌液，所得質粒可直接用于酶切、轉化、PCR 、測序及轉染等各種分子生物學實驗。

詳情介紹：

HiPURE高純度質粒大提試劑盒
產品及特點
本試劑盒用于高純度質粒DNA的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質，在低鹽、高pH條件下洗脫，得到純度較高的質粒 DNA 。使用本試劑盒每次可處理 1-5 ml 過夜培養的菌液，所得質粒可直接用于酶切、轉化、PCR 、測序及轉染等各種分子生物學實驗。

它具有下列特點：
1. 快捷、高效：操作簡便，得率高，節約時間。
2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。

成分規格

Buffer BL	25 ml	50 ml	100ml
Buffer S1	30ml	60ml	120ml
Buffer EB	10ml	30ml	60ml
Buffer S2	30ml	60ml	120ml
Buffer S4	30ml	60ml	120ml
Buffer W1（concentrate）	13ml	26ml	52ml
Buffer W2（concentrate）	15ml	30ml	60ml
RNase A (20 mg/ml)	300μl	600μl	1.2ml
Spin Column with Collection Tubes	50套	100套	200套
注意：使用前將全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1 中混合均勻，2 - 8℃保存;按要求在 Buffer W1 和 W2 中加入無水乙醇
本產品僅供科研使用，不得用于其它用途

保存條件

在室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存 12 個月；更長時間的保存可置于 2-8℃ 。若溶液產生沉淀，應在使用前置于 37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 應置于 2-8℃ 保存，可穩定保存 6 個月。

使用方法

柱平衡：

向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入400μl 的平衡液BL ，12,000 rpm (-13,400×g ) 離心 1 min ，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

1. 取 1-5 ml 過夜培養的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min ，盡量將上清去除干凈。

（注意：根據菌液的濃度決定取液量，濃度高時取 1.5 ml 菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）

2. 加入 250 μl Buffer S1 ，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻。

（注意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）

3. 加入 250 μl Buffer S2 ，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠。

（注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組DNA片段的污染）

4. 加入350μl Buffer S4 ，立即顛倒混勻，可見絮狀沉淀物產生，然后 12,000 rpm 離心 5-10 min，將上清液轉移到一干凈的離心管中，加入 500 μl 異丙醇混勻。

（注意：Buffer S4 加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀）

5. 小心將上清液轉移到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心30 sec ，棄收集管中濾液。

6. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer W1 ，12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。

（注意：Buffer W1為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發）

7. 加入 600 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。

（注意：Buffer W2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發）

8. 加入 500 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。

9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。

（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響質粒的后續使用）

10. 將吸附柱置于一新的無菌 1.5 ml 離心管（自備）中，加入 100-300 μl 的洗脫液 Buffer EB，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即質粒 DNA。

（注意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH 調整其pH值在7.0 - 8.5之間，為了增加質粒回收率，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集）

注意事項

1. 細-菌培養時間一般為 12-16 小時，如接種量大則應減少培養時間，過度培養會降低質粒質量甚至導致質粒 DNA 突變。

2. 每次使用時都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用。

3. 質粒的產量跟細-菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關。

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產品名稱：HiPURE高純度質粒大提試劑盒